 127. Evaluación de semen bovino congelado.
Catena, M. (1) y J. Cabodevila
(1). 1999. Taurus, 1(3):18-31.
(1) Fac. de Cs. Veterinarias.
Univ. Nac. del Centro de la Prov. de Bs. As. Campus Universitario, (7000)
Tandil.
Trabajo presentado en el Simposio
Internacional de Reproducción Bovina (UNCPBA), Tandil, 6 de agosto de 1999.
RESUMeN
El resultado de la
inseminación artificial (IA) es consecuencia de una serie de eventos
concatenados. Uno de los factores que influye es la calidad seminal. Si bien
no existe ningún examen in vitro altamente correlacionado con la
fertilidad, hay diversas pruebas de laboratorio que permiten estimar la
calidad seminal, muy útiles cuando son realizadas correctamente e
interpretadas con criterio.
En la evaluación de semen
congelado se tienen en cuenta al menos tres parámetros básicos: viabilidad
Post-descongelación, morfología y número de espermatozoides con motilidad
progresiva por dosis inseminante.
Algunos investigadores
consideran conveniente realizar controles bacteriológicos y/o virológicos
periódicos.
La IA tiene como objetivos
mejorar la calidad genética y también prevenir o eliminar enfermedades
venéreas. Sin embargo la técnica no está exenta de riesgos, pues puede
convertirse en vía de diseminación o en fuente de propagación de enfermedades
infecciosas. Por ello, los Centros de IA deben efectuar controles periódicos
a los toros dadores de semen para que los mismos estén libres de enfermedades
infecciosas.
Introducción
El resultado de la
inseminación artificial (IA) es la consecuencia de una serie de eventos
concatenados. Cuando se inseminan hembras fértiles, con una condición
corporal adecuada, el programa de IA resultará exitoso si se cuenta con un
sistema de detección de celos eficiente, si se utiliza semen de buena calidad
y si la técnica la ejecutan inseminadores avezados.
En este trabajo, se hará
referencia exclusivamente a uno de los aspectos señalados: la calidad
seminal
La premisa a tener en
cuenta cuando se evalúa semen es que no existe ningún examen in vitro
que esté altamente correlacionado con la fertilidad. Existen sí diversas
pruebas de laboratorio para “estimar” la calidad del semen que son
extremadamente útiles si son realizadas correctamente e interpretadas con
criterio.
Un hecho a tener en cuenta
es que el semen congelado no es un producto uniforme, esto se debe a dos
razones fundamentales:
1- Existe un rango de
cierta amplitud entre los valores mínimos requeridos para liberar una partida
de semen congelado al mercado y un semen de alta calidad.
Durante años, los
organismos gubernamentales de nuestro país y de los países tradicionalmente
exportadores de semen, establecieron exigencias para asegurar que los toros
residentes en los Centros de Inseminación Artificial estén libres de
enfermedades y por consiguiente que el semen congelado no sea portador de
agentes patógenos. En cambio, no se establecieron exigencias mínimas respecto
a características del semen tales como: viabilidad post-descongelación,
anormalidades o número de espermatozoides con motilidad progresiva por dosis.
Estas surgieron de la propia industria como una forma de garantizar calidad.
En los últimos años, se
establecieron normas ISO 9002 de calidad para los Centros de Inseminación
Artificial, contemplando exigencias mínimas respecto a los parámetros antes
señalados. Dichas exigencias no son altas, al menos para la viabilidad
post-descongelación, por lo tanto las diferencias de calidad en el semen
existente en el mercado actualmente, posiblemente se reduzcan pero como es
lógico de esperar no desaparecerán.
2- Aunque se parta de un
semen de alta calidad, la viabilidad de los espermatozoides puede verse
afectada durante la distribución y el almacenamiento, si en estas etapas no se
realiza un cuidadoso manejo del producto.
Esta observación no se debe
pasar por alto porque muchas veces la evaluación de dosis de semen congelado
arroja resultados que desaconsejan su utilización y los mismos se atribuyen
erróneamente al proceso de elaboración.
Teniendo en cuenta lo
enunciado hasta aquí, a nadie le quedarán dudas de que el porcentaje de preñez
a primoinseminación es el mejor indicador de la fertilidad. No obstante para
hacer una interpretación correcta de los resultados de la IA, hay que tener en
cuenta que la fertilidad de los rodeos varía aún durante períodos cortos.
Esto quedó evidenciado claramente en un trabajo donde se evaluó durante 5
meses consecutivos, el porcentaje de preñez a primoinseminación obtenido en un
mismo tambo y con un mismo inseminador, con una partida de semen congelado de
calidad excelente, elaborada a partir de dos eyaculados de un mismo toro.
Dicho parámetro osciló entre 40 % y 84,6%.
EVALUACIÓN de semen congelado
Para evaluar semen resulta
esencial contar con un microscopio de calidad, preferentemente con adaptación
para contraste de fase, una platina térmica y un baño María. Según Barth, en
la evaluación del semen congelado se deben tener en cuenta al menos 3
parámetros básicos. Ellos son:
- Viabilidad
post-descongelación.
- Morfología.
- Número de espermatozoides
con motilidad progresiva por dosis inseminante.
Algunos investigadores
consideran conveniente realizar controles bacteriológicos y/o virológicos a
espacios de tiempo variables según el caso . Barth recomienda determinar la
presencia de microorganismos patógenos únicamente cuando hembras fértiles
fracasan en ser preñadas con semen de buena viabilidad y morfología, en dosis
adecuada o cuando una historia de infertilidad implica una posible causa
infecciosa. En nuestro laboratorio efectuamos de rutina un control
bacteriológico a partir del momento que registramos un caso donde un semen que
había superado la evaluación de los parámetros básicos, pero que tenía un
elevado grado de contaminación con gérmenes inespecíficos, afectó seriamente
la fertilidad de un lote de vaquillonas inseminadas.
Viabilidad post-descongelación
Se determina mediante el
porcentaje de espermatozoides con motilidad progresiva y el vigor
espermático. Es recomendable efectuar además, un examen directo del acrosoma.
El daño a la membrana puede
no ser completamente expresado inmediatamente después de la descongelación.
Por ello, el semen debe ser incubado a 37º C durante 2 horas. Esta evaluación
es conocida como prueba de termorresistencia o de incubación.
Esta prueba puede ser
realizada de distintas formas. En nuestro laboratorio normalmente
descongelamos 2 pajuelas de la misma partida simultáneamente. A la hora 0,
vaciamos el contenido de una de ellas en un tubo de vidrio que contiene un
volumen de solución fisiológica equivalente al de la pajuela, procediendo de
inmediato a evaluar la motilidad progresiva y el vigor espermático. La otra
pajuela permanece en el baño María y es diluida en el momento de efectuar las
determinaciones correspondientes a la hora 2.
Las pastillas se diluyen en
1 ml de solución fisiológica y el semen se mantiene tapado dentro del baño en
un tubo de vidrio neutro.
a) Examen de motilidad:
el porcentaje de motilidad progresiva y el
vigor son determinados inmediatamente después de descongelado el semen y luego
de 2 horas de incubación.
Diversos métodos pueden ser
utilizados para determinar motilidad. Cuando se cuenta con experiencia,
generalmente se realizan estimaciones visuales rápidas, sin efectivamente
contar células.
Una gota de semen delgada y
uniforme es colocada entre porta y cubreobjeto tibios procediendo a evaluar a
100 aumentos el porcentaje de espermatozoides con motilidad progresiva y
luego, la tasa de progresión (vigor). Esta, puede ser cuantificado utilizando
la siguiente escala:
0= sin
movimiento.
1= ligera
ondulación o vibración de cola, sin progresión.
2=
progresión lenta, incluyendo detención y comienzo de movimiento.
3=
movimiento progresivo continuo y moderada velocidad.
4=
movimiento progresivo, rápido.
5=
movimiento progresivo muy rápido, en el cual las células son difíciles de
seguir visualmente.
El semen de buena calidad,
que ha sido recientemente descongelado, normalmente tiene 40-50% de
espermatozoides con motilidad progresiva y un vigor de 3-4. Después de 2
horas de incubación, estos valores generalmente disminuyen un 10- 15% y 1
punto, respectivamente.
Las normas mínimas para
motilidad exigidas en nuestro laboratorio son las definidas por el
Departamento de Medicina del Rodeo y Teriogenología de la Universidad de
Saskatchewan, Canadá y que se corresponden con las de las normas ISO 9002.
Ellas son:
0 hs= 25%
de espermatozoides con motilidad progresiva. Vigor 3.
2 hs= 15%
de espermatozoides con motilidad progresiva. Vigor 2.
En los últimos años han
sido introducidos análisis por sistemas de computación, los cuales
proporcionan un método objetivo de determinación de la motilidad espermática .
Una cámara de circuito cerrado de televisión, montada sobre un microscopio
alimenta información a un sistema de computación, el cual entrega
inmediatamente el porcentaje de motilidad progresiva, el vigor, la
concentración espermática y el número de espermatozoides móviles por
mililitro.
El costo del equipamiento
para este sistema es muy alto y no ofrece ventajas para predecir la fertilidad
en forma más acabada que los métodos tradicionales
b) Porcentaje de
acrosomas intactos: la determinación
del porcentaje de acrosomas intactos es un método morfológico de medición de
la viabilidad post-descongelación, el cual tiene correlación con la
fertilidad. Es un valioso complemento de la motilidad, para determinar la
viabilidad y fertilidad potencial del semen congelado.
Para examinar el acrosoma,
el movimiento de los espermatozoides debe ser detenido. Esto se logra
mezclando el semen con glutaraldehido bufferado al 0,2%, que fija las
membranas y previene su deterioro posterior. La preparación puede ser hecha
sobre el portaobjeto, colocando una pequeña dosis de semen próxima a una
gotita de glutaraldehido mezclándolas bien y colocándoles un cubreobjeto.
Doscientas células deben ser examinadas a 1000 aumentos, inmediatamente
después de descongelado el semen y luego de 2 horas de incubación. Los
valores mínimos para una clasificación satisfactoria son:
0 hs= 50%
de acrosomas intactos.
2 hs= 35%
de acrosomas intactos.
Otra prueba que se utiliza
para determinar integridad de membrana es el Test de resistencia osmótica. El
semen es incubado, 2 hs a 37º C, en una solución hipoosmótica de fructosa y
citrato de sodio. Se realizan observaciones seriadas (horas 0, 1 y 2) entre
porta y cubreobjeto, determinándose el porcentaje de espermatozoides vivos.
Estos reaccionan al shock osmótico enrollando la cola. Debe haber como mínimo
un 40% de espermatozoides reaccionantes.
La viabilidad
post-descongelación es el parámetro más importante y generalmente aparece
comprometida en aquellos casos donde se ha producido algún inconveniente en la
conservación del semen. En el Servicio de Evaluación de Semen que funciona en
nuestra Facultad, periódicamente se registran casos en que se solicita dicha
evaluación al comprobarse que, por descuido o accidente, el termo ha quedado
sin nitrógeno líquido por algún período más o menos prolongado. También hemos
comprobado que la viabilidad post-descongelación suele verse afectada en
aquellos casos en que el análisis revela un elevado grado de contaminación con
microorganismos inespecíficos que si bien son incapaces de provocar una
enfermedad reproductiva, pueden afectar la viabilidad de los espermatozoides
al competir con ellos por el oxígeno y los nutrientes.
Morfología espermática
La coloración de eosina-nigrosina
es ideal para evaluar la morfología espermática dado que al carecer de pasos
de lavado, todo lo que está en el semen se descubrirá en el frotis.
El concepto de defectos
primarios y secundarios sirve bien para evaluar la aptitud reproductiva de un
toro pero no para predecir la fertilidad de cierta partida de semen
congelado. Cabe recordar que por definición, un defecto primario es aquel que
se origina durante la espermatogénesis dentro del testículo y un defecto
secundario, el que se origina dentro del epidídimo o en el laboratorio.
Blom, citado por Barth,
introdujo un sistema de clasificación en defectos mayores y menores. Un
defecto mayor es aquél que, presente en gran número, ha sido asociado con
infertilidad. Los defectos menores son desviaciones que hasta ahora no han
sido asociadas con infertilidad. Este sistema de clasificación es abierto y
deberá ser modificado a medida que avance el conocimiento.
Una nueva clasificación en
defectos compensables y no compensables fue propuesta por Saacke y col. Los
espermatozoides con defectos compensables son aquellos incapaces de alcanzar
el oviducto o de participar del proceso de fertilización. Tales
espermatozoides tendrían poco efecto sobre la fertilidad, si se insemina con
un número suficiente de espermatozoides aptos. En cambio, los espermatozoides
con defectos no compensables (cráteres y vacuolas nucleares -defecto diadema-)
acceden al óvulo como los espermatozoides normales, son capaces de penetrar la
zona pelúcida desencadenar la reacción cortical impidiendo la entrada de otros
espermatozoides. La presencia de este tipo de defectos suele ser la causa de
baja fertilidad dado que, luego de la fertilización, se desarrollan embriones
de mala calidad que mueren durante los primeros días de gestación.
Si bien cada nueva
clasificación parece más apropiada que la anterior, cuando se evalúa la
morfología espermática siempre surgen interrogantes tales como:
¿Qué tipo de modificación
en la estructura de los espermatozoides es realmente una anormalidad y si
constituye una causa significativa de infertilidad?
¿Qué nivel de anormalidad
es tolerable?
Un conteo de 100 células es
satisfactorio cuando no existen problemas mayores. Cuando un gran número de
defectos espermáticos está presente, hasta 500 células deben ser contadas para
obtener un espermograma preciso. Se exige un 70% de células normales.
Con las colocaciones más
comunes que se utilizan habitualmente en los laboratorios es difícil detectar
alteraciones en la morfología espermática que no se vean reflejadas en
parámetros más sensibles como lo es por ejemplo, la viabilidad
post-descongelación
Número de espermatozoides con motilidad progresiva
por dosis
Surge de multiplicar el
número de espermatozoides totales por el porcentaje de espermatozoides con
motilidad progresiva a la hora 0 pos descongelación.
Existen al menos 4 formas
distintas de determinar el número de espermatozoides. En nuestro laboratorio,
se utiliza el método hemocitométrico
Un criterio vigente durante
años, basado en la definición de pubertad, indicaba que la dosis inseminante
no debía ser inferior a 10 millones de espermatozoides con motilidad
progresiva. Cuando el semen congelado en pastillas dominaba el mercado de la
IA en nuestro país, esta cifra era superada con creces dado que las pastillas
generalmente tenían 40 millones de espermatozoides, oscilando el porcentaje de
motilidad progresiva generalmente entre un 30 y 40 %.
La descongelación de
pajuelas, por tratarse de un proceso automatizado con tasas de enfriamiento
estrictamente controladas, significó un gran avance. Al resultar menos
traumáticos los procesos de congelación y descongelación fue posible disminuir
de manera significativa el número de espermatozoides contenidos en cada dosis
de semen.
La situación actual,
caracterizada por una alta competencia, hace que cada Centro de Inseminación
Artificial quiera obtener el máximo provecho de sus reproductores, sacando
mayor cantidad de dosis de cada eyaculado. Esto es común de observar en el
semen de toros de alto valor genético de razas lecheras, donde el número de
espermatozoides por dosis se ajusta de acuerdo a los datos de no retorno que
los Centros reciben periódicamente.
Las normas ISO 9002
establecen que la dosis inseminante debe tener un mínimo de 8 millones de
espermatozoides con motilidad progresiva. Este número puede reducirse a 6
millones si el semen posee más de 30% de espermatozoides con motilidad
progresiva y si la tasa de anormalidades es inferior al 25% o si, el
porcentaje de no retomo 60/90 de 300 primoinseminaciones resulta equivalente
al obtenido con 8 millones.
A los efectos de una
correcta interpretación de los análisis de laboratorio, se debe tener presente
que la evaluación del porcentaje de espermatozoides con motilidad progresiva
es subjetiva y que los toros difieren en el porcentaje en el que expresan su
máxima fertilidad. Al mismo tiempo, hay que recordar que por más que se
establezcan valores mínimos de referencia, no es conveniente ceñir eventos
biológicos a la más pura matemática.
Transmisión de patógenos microbianos en semen bovino
La IA tiene como objetivos
mejorar la calidad genética y también prevenir o eliminar enfermedades
venéreas. Sin embargo la técnica no está exenta de riesgos, pues puede
convertirse en vía de diseminación o en fuente de propagación de enfermedades
infecciosas a nivel nacional e internacional.
El semen criopreservado es
un excelente mecanismo de control sanitario si se tienen en cuenta las
siguientes premisas:
- Es necesario determinar
el estado sanitario de los sementales utilizados como dadores.
- El semen puede
vehiculizar bacterias, virus, hongos patógenos u oportunistas.
- La mayoría de estos
microorganismos sobreviven al proceso de congelación y a los antibióticos que
se añaden al diluyente.
- Es posible controlar el
eyaculado previo y a posterior de la congelación, para determinar la presencia
de gérmenes citados anteriormente.
- De un eyaculado se
obtienen generalmente muchas dosis de semen, por lo que el riesgo de
diseminación de enfermedades en diferentes rodeos el elevado.
- En IA el semen es
depositado en útero, por lo tanto, no es expuesto a los efectos bactericidas
de las secreciones del cuello uterino y de la vagina durante el estro.
Control en los Centros de Inseminación Artificial
Para cumplir con las
premisas señaladas, los Centros de IA deben efectuar cuarentena a los
reproductores previo a su ingreso y controlar periódicamente que los mismos
estén libres de enfermedades infecciosas. El personal debe estar debidamente
entrenado siendo necesario adoptar medidas de higiene que permitan la
obtención de pajuelas y/o pastillas de calidad.
En Argentina, antes de
ingresar a un Centro de IA, todo reproductor debe permanecer aislado durante
60 días de los toros residentes. Se realizan controles durante el período de
cuarentena y posteriormente se llevan a cabo controles semestrales para
asegurar que los reproductores estén libres de brucelosis, tuberculosis,
paratuberculosis, leptospirosis, campilobacteriosis genital bovina,
trichomoniasis, rinotraqueitis infecciosa bovina, diarrea vírica
bovina/enfermedad de las mucosas, leucemia bovina, de acuerdo con la
metodología descripta posteriormente.
- Controles durante el
período de cuarentena
Tuberculosis:
se efectúa una intradermoreacción con PPD
bovina a los 50 días de haber ingresado el animal al período de cuarentena.
Brucelosis:
se realizan dos pruebas serológicas, por el método de BPA,
como prueba tamiz y posteriormente pruebas complementarias de Wright y 2
mercaptoetanol, y dos pruebas de Huddleson en plasma seminal negativas,
efectuadas cada una de ellas con un intervalo de 45 a 60 días.
Leptospirosis:
se debe efectuar un control serológico mediante la
prueba de Martín y Pettit, se acepta un título de hasta 1/200.
Trichomoniasis:
se deben realizar cuatro controles negativos, con
intervalos de 7 días por cultivo de material prepucial.
Campilobacteriosis:
se efectúan cuatro controles negativos por
inmunofluorescencia directa de material prepucial, con intervalos de 7 días.
- Controles para la
exportación de semen
Además del control de las
enfermedades de rutina, se realizan análisis para:
Paratuberculosis:
test de ELISA o cultivo de materia fecal con
resultado negativo.
Aftosa:
se procesan 2 muestras por partida de semen a exportar,
para aislamiento viral.
rinotraqueitis
infecciosa bovina: se procesan 2 muestras por
partida de semen a exportar, para aislamiento viral.
Diarrea viral bovina:
se procesan 2 muestras por partida de semen a
exportar, para aislamiento viral.
En caso de ser solicitado
por el país importador se realiza también diagnóstico de leucemia bovina y
lengua azul.
Leucemia bovina:
dos pruebas de inmunodifusión en gel de agar con
resultado negativo, separadas 60 días.
Lengua azul:
una prueba de inmunodifusión en gel de agar con resultado
negativo.
- Recomendaciones para
la importación y exportación de semen
La Oficina Internacional de
Epizootias (OIE) efectúa las siguientes recomendaciones:
El semen debe provenir de
países o territorios libres de aftosa, peste bovina y pleuroneumonía
contagiosa. Los animales del Centro de IA deberán estar libres de brucelosis
y tuberculosis y los toros dadores y el semen deberán estar libres de lengua
azul y de las enfermedades que se controlan periódicamente en los Centros de
IA.
Eaglesome y García proponen
una clasificación de las enfermedades según el riesgo de transmisión en IA
(Cuadro 1)
Cuadro 1: Riesgo de
transmisión de enfermedades del bovino en inseminación artificial
|
Categoría |
Enfermedad |
Presencia del agente |
Lista de enfermedades OIE |
|
1 |
Enfermedades con evidencia de riesgo alta o
moderada |
|
Brucelosis bovina |
+ |
B |
|
Campilobacteriosis genital bovina
|
+ |
B |
|
Diarrea vírica bovina |
+ |
- |
|
Estomatitis vesicular |
+ |
A |
|
Fiebre aftosa |
+ |
A |
|
Haemophilus somnus |
+ |
- |
|
Mycoplasmosis |
+ |
- |
|
Rinderpest
|
+ |
A |
|
Rinotraqueitis infecciosa bovina
|
+ |
B |
|
Trichomoniasis |
+ |
B |
|
Tuberculosis bovina |
+ |
B |
|
Ubicuitarios (e.j. Pseudomona aeruginosa,
Escherichia coli) |
+ |
|
1 |
Enfermedades de bajo riesgo de transmisión
|
|
Lengua azul
|
+ |
A |
|
Leucemia bovina |
+ |
B |
|
Fiebre efímera bovina |
NR |
- |
|
Virus Akabane |
+ |
- |
|
Leptospirosis |
+ |
B |
|
2 |
Enfermedades con pequeña o ninguna información de
riesgo de transmisión |
|
a) Transmisión probable a través de inseminación
artificial |
|
Inmunodeficiencia bovina |
+ |
- |
|
Paratuberculosis bovina |
+ |
B |
|
Pleuroneumonía contagiosa bovina |
+ |
A |
|
b)Transmisión improbable a través de inseminación
artificial |
|
Lumpy skin disease |
+ |
|
|
Fiebre del Valle del Rift |
NR |
A |
|
Fiebre Q |
+ |
B |
|
Rabia |
NR |
- |
|
Septicemia hemorrágica |
NR |
B |
|
Fiebre catarral maligna |
NR |
B |
|
Encefalopatía espongiforme bovina |
NR |
B |
|
Listeriosis |
+ |
- |
|
Anaplasmosis |
NR |
B |
|
Babesiosis |
NR |
B |
|
Chlamydia |
+ |
- |
|
Hongos, levadura |
+ |
- |
|
+: Presencia del agente
infeccioso en semen; NR: No reportado |
Microorganismos asociados con la transmisión por
semen
1. Rinotraqueitis
infecciosa bovina
El BHV-1 replica en la
mucosa del prepucio, pene y parte distal de la uretra. Cuando se produce
reactivación viral, se excreta virus por semen. En este caso, puede o no
haber respuesta sérica y el virus puede estar presente en semen, sin que el
animal manifieste signos clínicos de enfermedad.
Los toros liberan virus
durante la fase aguda y también durante la infección latente, pudiendo el
semen infectarse por infección local primaria del prepucio, con posterior
producción de anticuerpos neutralizantes. Animales con infección latente
pueden tener títulos muy bajos o ser seronegativos, principalmente cuando no
se producen las causas predisponentes para la reactivación viral. La
infección del tracto genital primario puede inducir baja respuesta o ninguna.
En ensayos realizados, semen de toros seropositivos a BHV-1 puede estar libre
de virus cuando los toros son apropiadamente manejados con escasas situaciones
estresantes.
Diagnóstico.-
de rutina para semen se realiza aislamiento
viral e identificación en cultivos celulares de origen bovino.
Experimentalmente, se puede realizar identificación del virus en semen por PCR.
En Centros de IA es preferible usar toros seronegativos y extraer muestra de
sangre a los reproductores para efectuar pruebas serológicas 21 días después
de la recolección de semen. Además, se deben analizar por lo menos 2 pajuelas
porque el semen es diluido antes de congelar y no todas las pajuelas
necesariamente pueden contener virus.
2. Enfermedad de las
mucosas- Diarrea viral bovina
El BVDV es excretado en
semen de toros durante la fase aguda, en la infección transitoria y también en
reproductores persistentemente infectados (PI).
Diagnóstico.-
de rutina se realiza fijación de complemento,
inmunoflorescencia indirecta y seroneutralización para medir anticuerpos.
Para determinación del agente se realiza aislamiento viral, ELISA con antígeno
de captura y PCR transcriptasa reversa. El mejor método para identificar PI
es la examinación virológica y dos muestras de sangre con 4 semanas de
diferencia.
3. Brucelosis
Las brucelas en toros
pueden localizarse principalmente en vesículas semanales, ampolla, testículos
y epidídimo. Los reproductores infectados pueden ser serológicamente
positivos o negativos, pudiendo aislarse brucelas en semen.
Diagnóstico.-
se considera que para ingreso a un Centro de IA, las
pruebas de aglutinación serían suficientes, pero teniendo en cuenta lo dicho
anteriormente, sería beneficioso procesar el semen para aislamiento y
aglutinación del plasma seminal, particularmente en toros provenientes de
áreas de riesgo.
4.Leptospirosis
En bovinos produce
infertilidad, aborto temprano y tardío. La serovar harjo ha sido
aislada de vesícula seminal, epidídimo, y testículo de animales naturalmente
infectados. Lesptospira spp ha sido aislada de semen de toros
naturalmente y experimentalmente infectados, siendo reportada la transmisión
seminal. Leptospira sobrevive en extendidos de semen no congelado con o sin
antibióticos.
Diagnóstico.-
la prueba de laboratorio de referencia en
leptospirosis es la microaglutinación. Se han desarrollado también
enzimainmunoensayos para detección de antígenos y anticuerpos. En semen han
sido reportadas dificultades para el aislamiento de leptospiras en toros
experimentalmente infectados. Se están desarrollado pruebas moleculares para
su detección e identificación.
5. Campilobacteriosis
genital bovina.- El toro es portador asintomático de la enfermedad y no
presenta modificaciones en las características del semen. La incidencia en
los toros aumenta con la edad. Se localiza en la mucosa prepucial y en la
mucosa del glande. Puede ser transmitido a la hembra a través del servicio
natural o artificial.
Diagnóstico.-
de rutina se realiza inmunoflorescencia
directa del esmegma prepucial en la cuarentena previa al ingresar al Centro de
IA. Luego, controles semestrales. También se puede realizar cultivo de semen
fresco y congelado para aislamiento e identificación. En la actualidad se ha
de desarrollado un análisis por PCR para detectar cantidades muy bajas por
mililitro de semen diluido de toros experimentalmente infectados.
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