 088. Toma de muestras en rumiantes.
Dra. Elena Gracia, Dra. Gema Chacón, Dr.
Bernardino Moreno, Dra. Ana Fernández, Iñaki Albizu, Dr. Rafael Baselga.
Exopol. Autovacunas y Diagnóstico.
Pol. Río Gallego, D/8, 50840, San Mateo,
Zaragoza. exopol@exopol.com, tel.
976694525
Es frecuente que para apoyarnos en el diagnóstico clínico
debamos remitir muestras al laboratorio. Hay varios puntos importantes a
tener en cuenta:
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Tamaño de la muestra.
-
Selección de la muestra adecuada y envío
-
Solicitud de la técnica diagnóstica e interpretación de los
resultados.
SELECCIÓN DE
MUESTRA.
1. Animales vivos
Enviarlos sin comida ni agua, en jaulas de tamaño suficiente, que impida
la salida de material al exterior.
2. Fluidos orgánicos
2.1. Sangre
2.1.1. Suero sanguíneo
Indicado para análisis serológicos y bioquímicos.
Sangre recogida en tubos sin anticoagulante. Se puede enviar la sangre
completa al laboratorio a temperatura ambiente y en el tubo de recogida. El
suero limpio se puede congelar hasta el momento del análisis. Nunca
congelar los sueros con el coágulo.
Tubos con heparina de sodio o de
litio (75 UI/ml de sangre). Adecuados para el cultivo bacteriano y de
células.
2.1.2. Sangre entera
Indicada para cultivos bacterianos (hemocultivos), cultivos de células
linfoides, determinación de gamma- interferón , diagnóstico de hemoparásitos
y algunos análisis bioquímicos.
La sangre debe recogerse en condiciones de esterilidad con
anticoagulante:
-
EDTA (1mg/ml). Adecuado para hemocultivos.
-
Heparina de sodio. Adecuado para hemocultivo y cultivo de células.
-
Citrato sódico. Adecuado para
pruebas de coagulación sanguínea y velocidad de sedimentación.
La sangre debe conservarse refrigerada a 4ºC y llegar al
laboratorio en las 24 h posteriores a la recogida. Nunca debe congelarse.
La sangre para el diagnóstico de hemoparásitos debe recogerse de una vena
marginal y con el animal en fase febril.
Para maximizar el volumen de suero recogido, o para
conservar la muestra un tiempo antes de enviarla al laboratorio, el tubo se
deja inclinado o invertido a temperatura ambiente un mínimo de 30 minutos y
luego se retira el coágulo pasando el suero a un tubo limpio.
2.2. Líquido cefalorraquídeo y sinovial
Se deben tomar con heparina estéril. Hay que evitar contaminar con
sangre. Las muestras se deben refrigerar.
2.3. Leche
Se recogen tras la limpieza y desinfección del pezón, desechando el
primer chorro de leche y en tubos estériles, preferentemente de boca
estrecha para evitar contaminaciones. Se envían a temperatura ambiente o
refrigeradas.
2.4. Orina
La obtención de orina debe hacerse en las mejores condiciones de
esterilidad posibles e idealmente con un catéter o seleccionando el final de
la micción. La orina debe enviarse refrigerada, no se debe congelar.
Contenedores estériles y de seguridad
biológica (evitan derrames). Ideales para el envío de líquidos (orinas,
heces, etc.) o de pequeñas muestras de órganos.
3. Exudados
En animales vivos o procedentes de necropsia, se pueden tomar muestras de
exudados nasales, traqueobronquiales, auriculares, conjuntivales, vaginales
(uterinos) y rectales, así como de diversos órganos, empleando hisopos. Para
ello hay que limpiar y desinfectar la piel que rodea el orificio natural, o
la superficie del órgano a muestrear, e introducir profundamente el hisopo
con especulo o cánula protectora cuando sea posible ya que evita
contaminaciones. El hisopo debe raspar suavemente la mucosa o zona interna
del órgano para obtener una buena población celular o bacteriana.
Para tomar muestras de mucosa rectal, vaciar el contenido rectal con un
guante, eliminando las heces antes de introducir el hisopo. En la toma de
muestras genitales, introducir el hisopo hasta el cervix, ayudados de un
espéculo para evitar contaminaciones.
Si la muestra llega al laboratorio en 24-48 h no necesita refrigeración.
Nunca congelar, ya que los hisopos deben llevar un medio de transporte con
agar que evite la desecación celular y mantenga la viabilidad bacteriana.
Hay medios de transporte generales (Stuart, Amies), especialmente indicados
para bacterias anaerobias (Cary Blair) y otros indicados para el transporte
de virus que contienen antibacterianos y antifúngicos.
Hisopos estériles para toma de
muestras. El medio de conservación mantiene la viabilidad de las bacterias y
conserva las células desamadas para poder realizar estudios
inmunocitoquímico.
4. Raspados cutáneos
En el caso de áreas depiladas, costrosas o escamosas, se raspa con un
bisturí estéril en los bordes del área lesionada, tomando pelo, raspado de
piel y profundizando hasta que sangre, en un contenedor estéril. Los
abscesos hay que vaciarlos y raspar con un hisopo la pared interna. Las
dermatitis hay que lavarlas con agua y jabón y raspar con un hisopo. Las
muestras se pueden enviar a temperatura ambiente.
5. Heces
Las heces deben recogerse directamente del recto del animal en un
contenedor limpio, bolsa o guante en el caso de estudios coprológicos, pero
estéril si se pide un cultivo bacteriano. Si se recogen heces del suelo, la
proliferación accidental de larvas de vida libre o la posible desecación de
las heces pueden falsear los resultados. No se deben congelar.
Envío correcto, el feto está envuelto
en una bolsa de plástico hermética y refrigerado.
Envío incorrecto. Caja no adecuada
y con perdida de líquidos.
Las bolsas de seguridad biológica
evitan el derrame de líquidos y son las adecuadas para el envío de órganos.
6. Necropsia
Los animales seleccionados preferentemente deben estar vivos o haber
muerto recientemente y deben ser representativos del caso clínico..
La necropsia siempre se debe realizar de forma ordenada, sistemática, y
completa.
La descripción de lesiones macroscópicas (anatomía patológica)
corresponde al veterinario que realiza la necropsia. La descripción de
lesiones microscópicas (histopatología) es competencia del laboratorio al
que se remiten las muestras.
Identificación y envío de muestras.
Las muestras remitidas deben acompañarse siempre de un informe
clínico, con datos de necropsia en su caso, (http://www.exopol.com/hojaEnvioMuestras.pdf)
con los datos del veterinario y la explotación y la analítica solicitada. Si
se solicita una analítica muy clara se puede obviar en cierto sentido la
información que proporcionas al laboratorio, pero si quieres que el
laboratorio oriente la analítica y el diagnóstico, debe contar con la máxima
información posible.
La refrigeración y congelación se debe mantener con acumuladores de frío. No emplear nunca agua congelada.
Órganos procedentes de necropsias
Trozo de intestino con extremos anudados
6.1. Para análisis bacteriológicos hay que enviar el
órgano afectado entero o un zona representativa (especialmente en el
caso de los pulmones), sin lavar, sin sangre y refrigerado, para
evitar la autolisis y la proliferación de flora oportunista contaminante. La
congelación afecta a la viabilidad de muchas bacterias y supone falsos
resultados negativos. Los órganos a enviar dependen del proceso y de los
hallazgos de la necropsia, pero si esto no está claro, o se duda de los
órganos diana del proceso, en general se debe enviar: Pulmón con corazón y
tráquea, hígado, bazo, riñón e intestino. Si el animal necropsiado es de
gran tamaño podemos seleccionar la zona del órgano que veamos afectada, pero
siempre enviando trozos grandes. En el caso del intestino hay que enviar un
tramo de cada parte intestinal (yeyuno, ileon e intestino grueso), con los
extremos ligados para evitar la salida de contenido.
Cada órgano se debe enviar en una bolsa independiente evitando
contaminaciones entre órganos. Es especialmente importante aislar el
intestino del resto de las muestras. No es necesario utilizar bolsas o
recipientes estériles, pero si limpios.
6.2. Para análisis inmunocitoquímico o PCR Pueden enviarse
órganos enteros o pequeños fragmentos que incluyan una porción de tejido
sano y otra de tejido afectado. Cada órgano debe ir en una bolsa o envase
independiente, refrigerado o congelado, y procurando evitar los procesos de
autolisis.
6.3. Para estudios histopatológicos las muestras deben
incluir una porción de tejido sano y otra alterada que deben cortarse en
fragmentos de un espesor aproximado de 1 cm o inferior, y enviarse incluidas
en una solución de formalina al 10% (900 ml de agua con 100 ml de
formaldehído al 40%). La proporción correcta de tejido en formalina debe
ser de 1:10.
6.4. Para estudios toxicológicos los tejidos y líquidos
deben ser tan recientes como sea posible. En la conservación, es importante
emplear recipientes de plástico, evitando tanto el metal como el vidrio que
pueden modificar la muestra. En todo caso, es importante contactar con el
laboratorio para seleccionar la muestra idónea y el contenedor adecuado, que
dependerá del tipo de tóxico que se quiera analizar.
Botes y bolsas de seguridad biológica
con las muestras seleccionadas en necropsia y perfectamente identificados.
7. Calidad de una técnica dignóstica
La calidad se compara con un número suficientemente alto de muestras de
referencia, supongamos 200 positivas y 200 negativas con estos resultados:
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PRUEBA DE REFERENCIA
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POSITIVOS
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NEGATIVOS
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Total |
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PRUEBA A ESTUDIO
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POSITIVOS
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180 (a; Positivos verdaderos)
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24 (b; Falsos positivos)
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a+b
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NEGATIVOS
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20 (c; Falsos negativos)
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176 (d; Negativos verdaderos)
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c+d
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Total |
a+c
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b+d
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a+b+c+d
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Seguridad: la proporción de resultados correctos, tanto positivos
como negativos. Cálculo: (a+d) / (a+b+c+d); En el ejemplo 89%.
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Sensibilidad: la probabilidad de identificar correctamente las
muestras positivas. Cálculo: a / (a+c), En el ejemplo 90%.
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Especificidad: la probabilidad de identificar correctamente las
muestras negativas. Cálculo: d / (b+d), En el ejemplo 88%.
La repetibilidad indica el grado en el que la prueba da siempre
los mismos resultados con las mismas muestras. Una prueba de baja
repetibilidad no es útil.
No obstante, la utilidad de una técnica en la práctica viene dada por sus
valores predictivos:
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Valor predictivo positivo: proporción de muestras que realmente
son positivas y que la técnica empleada da un resultado positivo. Cálculo: a
/ (a+b), En el ejemplo 88%.
-
Valor predictivo negativo: proporción de muestras realmente
negativas que dan un resultado negativo en la prueba. Cálculo: d / (c+d), En
el ejemplo 89%.
Los valores predictivos no son una propiedad inherente a la técnica como
la sensibilidad y especificidad, sino una propiedad relativa que varía en
función de la prevalencia que tenga la infección en la población sobre la
que se aplique la técnica. A medida que disminuye la prevalencia, disminuye
también el valor predictivo del resultado positivo, o lo que es lo mismo,
vamos a obtener muchos resultados falsos positivos. Cuando las prevalencias
aumentan, lo que disminuye es el valor predictivo del resultado negativo.
Fuente:
www.exopol.com
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